作為一種分析性生物化學(xué)測定，ELISA 涉及通過在“分析"期間繼續(xù)使用液體試劑的方法（即受控序列）檢測液體樣品中的“分析物"（即對其存在進(jìn)行定量或定性分析的特定物質(zhì)）。生化反應(yīng)會產(chǎn)生一個信號，該信號可以很容易地量化和解釋為樣品中分析物量的量度），該信號保持液態(tài)并保持在反應(yīng)室內(nèi)或保持反應(yīng)物被包含在內(nèi)。

作為一種異質(zhì)測定，ELISA 通過將某些組分吸附到物理固定的固相上來分離分析反應(yīng)混合物的某些組分。在 ELISA 中，將液體樣品添加到具有特殊結(jié)合特性的固定固相上，然后依次添加多種液體試劑、孵育和洗滌，然后發(fā)生一些光學(xué)變化（例如，酶促反應(yīng)產(chǎn)物的顯色）孔中的最終液體，用于測量分析物的量。定性“讀數(shù)"通?；谕ㄟ^分光光度法檢測透射光的強(qiáng)度，這涉及對某些特定波長的光通過液體（以及多孔板格式中孔的透明底部）的透射進(jìn)行定量。檢測的靈敏度取決于分析反應(yīng)過程中信號的放大。由于酶反應(yīng)是放大過程，因此信號是由酶產(chǎn)生的，酶以固定比例與檢測試劑連接，以實現(xiàn)準(zhǔn)確的定量 - 因此稱為“酶聯(lián)"。

分析物也稱為配體，因為它會特異性結(jié)合或連接到檢測試劑，因此 ELISA 屬于更大的配體結(jié)合測定類別。配體特異性結(jié)合試劑是“固定的"，即通常涂在透明底部，有時也涂在孔的側(cè)壁上（這里是固定的“固相“固體基質(zhì)"，而不是可以被固定的固體微粒/珠子）。洗掉），它通常被構(gòu)建為稱為“ELISA 板"的多孔板。通常，與其他形式的免疫測定一樣，使用抗原-抗體型反應(yīng)的特異性是因為它很容易作為試劑大量產(chǎn)生特異性針對抗原的抗體?；蛘?，如果分析物本身是抗體，